Биология - наука о жизни

Ультрацентрифужный метод

 

Главная страница

Седиментационный анализ — один из наиболе важнейших методов изучения молекулярных механизмов взаимодействия вирусов с клетками.

Ультрацентрифужный метод применяется в вирусологии и для определения плотности исследуемых молекул, вирусов или вирусных компонентов. Дело в том, что частицы не всегда оседают при центрифугировании. Если их окружает среда с большей плотностью, чем они сами, то частицы будут всплывать. И тем скорее, чем выше скорость вращения и создаваемая сила тяжести.

В таком случае исследователь готовит в центрифужной пробирке перепад концентрации раствора, чаще всего сахарозы или солей тяжелых металлов, например хлорида цезия, получая так называемый градиент плотности. При ультрацентрифугировании изучаемый материал займет в этом градиенте место, соответствующее его плотности.

Плотностный и седиментационный анализы нашли широчайшее применение в вирусологии. Они позволяют легко и быстро разобрать клетку на составные части,  высокой степенью очистки сконцентрировать практически любой вирус, разобрать его на составляющие молекулы

Покажем это па одном примере. Долгое время исследователям пе удавалось выделить и изучить онковирусы млекопитающих (подробнее об этих вирусах мы расскажем в экскурсии четвертой). Многие из них не обладают биологической активностью, обнаруживаемой экспериментально. Помогли ультрацентрифуги. Вирусологи исходили из того, что почти все представители этой группы вирусов имеют строго определенную плотность — 1,16—1,18 г/см3.

Материал, в которой предполагали наличие онковирусов, центрифугировали в угловых роторах, чтобы осадить вирусы из большого объема — сконцентрировать их. Затем вирусный концентрат (пока только предполагаемый!) наносили на градиент плотности сахарозы и центрифугировали в горизонтальном роторе. Использование материала, предварительно меченного радиоактивный изотопом, показало: в области с плотностью 1,16 — 1,18 г/см3 концентрируются некие частицы. Электронное микроскоп ирован не материала из этой зоны плотности градиента сахарозы подтвердило: да, здесь концентрируются вирусные частицы с характерной только для онковирусов морфологией! Таким образом, в частности, были обнаружены и выделены онковирусы, которые рассматривались как вероятные кандидаты в возбудители лейкоза и некоторых злокачественных опухолей человека.


<<<назад                    далее>>>